HLA抗原的检测（二） - HLA基因检测新闻
（四)HLA-DP抗原的检测
HLA-DP抗原的检测可采用预处理淋巴细胞分型试验（primed lymphocyte typing test,PLT)基本步骤是首先取有一个单倍体相同的两个个体的淋巴细胞进行混合培养，这在双亲与子女间很容易找到，如亲代a/b,子代a/c。先将a/c经X线照射作为刺激细胞，则反应细胞a/b只对c单倍体抗原起反应。经9-14天混合培养，反应细胞分裂增殖逐渐停止，最后培养中留下已致敏的记忆细胞，称为预处理细胞或PLT分型细胞，液氮保存。当被检者淋巴细胞含c单倍体抗原，则预处理细胞表现一种迅速的回忆反应，在24-30小时内迅速发生增殖。因此本法属于阳性分型法。
（五)HLA的DNA分型及评述
1991年11月召开的11届IHW上提出了HLA的DNA分型方法，使得HLA多态性的检测有了突破性的进展，这些方法众多，现列举如下。
（1)PCR-ASO（或PCR-SSO)：即PCR技术与等位基因特异顺序的寡核苷酸（allelic specific oligonucleotide,ASO)或顺序待异性的寡核苷酸（sequence specific oligonucleotide,SSO)探针相结合的方法。用PCR技术扩增从需定型细胞中抽提出的高度多态性基因片段的DNA，再与特异的序列明确的寡核苷酸（SSO)探针杂交，可区分特定编码区DNA顺序的细微差别。
（2)PCR-RFLP：即PCR技术与限制性片段长度多态性（restriction fragment lengthpolmorphism,RFLP)分析技术相结合。HLA抗原多态性是由其编码基因的碱基顺序不同的结果。不同个体HLa DNA碱基顺序的差别造成了限制性内切酶切位点的不同，从而导致DNA电泳后限制性片段长度上的多态性。主要步聚是经印迹法转移到硝酸纤维膜上，然后用已知的cDNA探针进行杂交，经放射自显影可查知相应基因的何种长度的DNA酶切片段上。但此技术所用的内切酶量大，方法复杂，耗费昂贵，已更先进、精确的以PCR为基础的其它DNA分型所取代。
（3)PCR-SSCP：即PCR与单链构象多态性（single strand conformation polymorphism,SSCP)分析相结合的方法。其原理是单链DNA可形成稳定的构象，在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中其迁移率不仅与链的大小有关，而且受链的核苷酸顺序的影响。由于使用相同引物扩增产物长度-致因而单链DNA在电泳中的迁移格局反映了单链核苷酸组成的不同，可十分敏感地检测等位基因间DNA顺序的微小差别，目前此技术已应用于DP等位点的分型。
尽管采用DNA水平的HLA分型工作有了很大进展，但血清学分型，特别对I类基因产物仍是分型基础。在可以预见的时期内，DNA分型是无法取代它的。但应该强调，在第11次IHW及随后召开的WHO-HLA命名委员均已早明，今后凡属新HLA特异性必须有相应的DNA序列为基础，否则不再予以命名。
应该看到，HTC与PLT在对HLA-D和HLA-DP特异性检测上有过肯定的贡献，但由于方法较为复杂，耗时费力，且影响因素多，精确程度有限，已逐渐被众多DNA水平定型方法所取代。
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